簡(jiǎn)要描述:EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑(Ⅱ)使用新型陽(yáng)離子聚合物,在保留傳統(tǒng)陽(yáng)離子聚合物優(yōu)點(diǎn)同時(shí),有兩個(gè)重要改進(jìn),一是顯著降低了轉(zhuǎn)染試劑的細(xì)胞毒性;二是顯著提高轉(zhuǎn)染效率,細(xì)胞的適用范圍更廣。經(jīng)比對(duì)試驗(yàn),在選用的測(cè)試細(xì)胞中,轉(zhuǎn)染效率、細(xì)胞毒性均優(yōu)于大部分市售轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品,接近或超過(guò)Lipo3000。
產(chǎn)品分類
Product Category詳細(xì)介紹
品牌 | 其他品牌 | 貨號(hào) | AC04L011 |
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規(guī)格 | 1mL | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合 |
產(chǎn)品描述
EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑Ⅱ,作為新一代的轉(zhuǎn)染試劑,其轉(zhuǎn)染原理是帶正電的聚合物與核酸分子的帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后,與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用,并通過(guò)胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞。該產(chǎn)品經(jīng)過(guò)本公司的優(yōu)化處理,具有轉(zhuǎn)染效率高,細(xì)胞毒性低,操作簡(jiǎn)單,重復(fù)性好,適用范圍廣等特點(diǎn)。
訂購(gòu)信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑(Ⅱ) | AC04L011 | 1 mL | 690 |
保存方法
冰袋運(yùn)輸,4℃保存,保質(zhì)期12個(gè)月。不可冷凍!
使用方法
(以 24 孔板為例,其他培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染請(qǐng)參考表1)
1. 接種細(xì)胞
對(duì)于貼壁細(xì)胞,轉(zhuǎn)染前18-24 h進(jìn)行鋪板(不含抗生素),使其在轉(zhuǎn)染時(shí)的密度大約在80%左右。對(duì)于懸浮細(xì)胞,轉(zhuǎn)染當(dāng)天,在配制EZ Trans-DNA復(fù)合物之前進(jìn)行鋪板,每500 µL生長(zhǎng)培養(yǎng)基中加入4~8×105cells。
【注】:培養(yǎng)液中的血清不影響轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染試劑使用量受細(xì)胞類型及其他實(shí)驗(yàn)條件影響,建議初次使用時(shí)設(shè)置梯度進(jìn)行優(yōu)化合適的使用量。
2. 準(zhǔn)備EZ Trans-DNA復(fù)合物
(1)對(duì)于每孔細(xì)胞,將1 μg 質(zhì)粒DNA稀釋到40 μL無(wú)血清的高糖DMEM培養(yǎng)基(或OPTI-MEM I 培養(yǎng)基),混勻。
(2)對(duì)于每孔細(xì)胞,將3 μL EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑稀釋到40 μL無(wú)血清的高糖DMEM培養(yǎng)基(或者OPTI-MEM I 培養(yǎng)基),輕輕混勻。
【注】:無(wú)血清的高糖DMEM培養(yǎng)基是稀釋液,不能使用含血清的培養(yǎng)基進(jìn)行DNA和EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑的稀釋。因?yàn)镋Z Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成過(guò)程不能含有血清。
(3)將稀釋好的EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒DNA中,輕輕混勻。
【注】:此混合的順序不能反向進(jìn)行。
(4)室溫放置10-15 min,以形成EZ Trans-DNA復(fù)合物。
3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞
(1)將上述80 μL EZ Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物均勻滴入到含細(xì)胞的培養(yǎng)皿中。輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿或輕微振蕩,讓EZ Trans-DNA復(fù)合物分散均勻。
(2)在37℃,5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)6-18 h,去除含EZ Trans-DNA復(fù)合物的培養(yǎng)液,更換新的培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)至對(duì)轉(zhuǎn)入基因表達(dá)分析。
【注】:篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,轉(zhuǎn)染細(xì)胞24 h后,將細(xì)胞傳代至新鮮的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中(將細(xì)胞稀釋10倍以上),在37℃,5% CO2培養(yǎng)箱中孵育24 h,加入篩選培養(yǎng)基。在有轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的藥物篩選條件下,約 1~2周可篩選到耐藥性克隆,在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
注意事項(xiàng)
1.質(zhì)粒質(zhì)量:請(qǐng)務(wù)必使用高純度無(wú)內(nèi)毒素轉(zhuǎn)染級(jí)質(zhì)粒。通過(guò)260 nm光吸收測(cè)定DNA 濃度,260 nm / 280 nm比值確定DNA純度(比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi))。如有可能,請(qǐng)通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)粒的完整性。
2. 細(xì)胞條件:使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保細(xì)胞沒有被細(xì)菌、真菌或支原體污染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞,請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者李記生物的胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)液要求:EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑可用于有血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)染,并且轉(zhuǎn)染前不需要換培養(yǎng)基。但是,制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)要求用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑,因?yàn)檠鍟?huì)影響復(fù)合物的形成。確保細(xì)胞培養(yǎng)液沒有被細(xì)菌、真菌或支原體污染。轉(zhuǎn)染時(shí)培養(yǎng)液中不添加抗生素。
4. 試劑用量的優(yōu)化:DNA濃度和轉(zhuǎn)染試劑使用量受細(xì)胞類型及其他實(shí)驗(yàn)條件影響,初次使用應(yīng)優(yōu)化DNA濃度和轉(zhuǎn)染試劑量以得到大的轉(zhuǎn)染效率。使用者可嘗試每 1 μg DNA使用 1~4 μL 體積EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。DNA和轉(zhuǎn)染試劑的比例,通常推薦是1:2~1:5。
培養(yǎng)器皿 | 培養(yǎng)液體積(mL) | DNA量(μg) | EZ Trans (μL) | 稀釋液(μL) |
48孔板 | 0.3 | 0.5 | 1.5 | 2 × 25 |
24孔板 | 0.5 | 1 | 3 | 2 × 40 |
12孔板 | 0.75 | 1.5 | 4.5 | 2 × 60 |
6孔板 | 1 | 3 | 9 | 2 × 125 |
35 mm培養(yǎng)皿 | 1 | 3 | 9 | 2 × 125 |
60 mm 培養(yǎng)皿 | 3 | 6 | 18 | 2 × 250 |
100 mm 培養(yǎng)皿 | 9 | 12 | 36 | 2 × 500 |
【注】:該表使用量?jī)H供參考,具體使用量還需根據(jù)細(xì)胞類型及其他實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化。使用時(shí)DNA(μg): EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑(μL)比值保持在1:2~1:5。
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